Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
β-TrCP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400971
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- β-TrCP Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico β-TrCP, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: β-TrCP Antibody (C-6): sc-390629
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
β-TrCP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400971 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
BTRC codifica la proteina F-box β-TrCP, una componente di riconoscimento del substrato del complesso ligasi E3 dell’ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), che indirizza motivi degron fosforilati verso l’ubiquitinazione e la degradazione proteasomiale. β-TrCP regola molteplici assi di segnalazione, inclusa la via di NF-κB tramite il turnover di IκB, la via Wnt/β-catenina attraverso la degradazione della β-catenina e il controllo del ciclo cellulare modulando proteine come CDC25A ed EMI1. Attraverso queste vie, BTRC influenza la proliferazione, le risposte infiammatorie, l’adattamento al danno al DNA e i programmi epitelio–mesenchimali. Un’attività di β-TrCP deregolata è stata associata ad attivazione anomala delle vie di segnalazione e instabilità genomica in diversi contesti di ricerca oncologica e immunologica.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β-TrCP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BTRC in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BTRC insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BTRC a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β-TrCP.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BTRC per lo studio della segnalazione di β-TrCP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni BTRC critici per la funzione di β-TrCP
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BTRC per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal β-TrCP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal β-TrCP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BTRC. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal β-TrCP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR β-TrCP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BTRC per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BTRC definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.