β-tectorin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423332

Übersicht

Tectb kodiert β-Tektorin, ein sezerniertes Glykoprotein, das zur Architektur der extrazellulären Matrix der Tektorialmembran des Innenohrs beiträgt und dort bei der Organisation supramolekularer Assemblierungen hilft, die für die Cochlea-Mechanik wichtig sind. Indem β-Tektorin die biomechanische Kopplung zwischen der Tektorialmembran und den Stereozilien der Haarzellen mitprägt, unterstützt es eine effiziente mechanoelektrische Transduktion und schallinduzierte Signalübertragung. Eine Störung von Matrixkomponenten der Tektorialmembran, einschließlich β-Tektorin-assoziierter Netzwerke, wird mit veränderten Hörschwellen und sensorineuralen Hörphänotypen in Verbindung gebracht, wodurch Tectb ein nützlicher Genlokus für die Untersuchung der matrixabhängigen Regulation sensorischer Funktionen ist. In Mausmodellen ermöglicht eine Beeinträchtigung von Tectb die Analyse der Assemblierung der extrazellulären Matrix, der epithelialen Sekretion sowie von Struktur‑Funktions-Beziehungen, die der auditiven Verarbeitung zugrunde liegen.

Das β-tectorin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tectb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tectb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tectb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die β-tectorin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tectb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der β-tectorin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tectb-Exone abzielen, die für die β-tectorin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tectb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom β-tectorin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom β-tectorin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tectb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das β-tectorin HDR-Plasmid (m) und β-tectorin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tectb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tectb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.