Plasmide Double Nickase (h) β-Gal: sc-401194-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) β-Gal correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide β-Gal Double Nickase (h) et le plasmide β-Gal Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GLB1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: β-Gal Antibody (B-12): sc-377257
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) β-Gal | sc-401194-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) β-Gal | sc-401194-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GLB1 code la β-galactosidase humaine (β-Gal), une exoglycosidase lysosomale qui hydrolyse les résidus terminaux de β-galactose du ganglioside GM1, des glycoprotéines et des glycosaminoglycanes. Cette activité soutient le flux catabolique lysosomal et le renouvellement des glycosphingolipides, en interaction avec le trafic endo-lysosomal, la fonction autophagie–lysosome et les voies de contrôle qualité cellulaire. L’altération de GLB1 perturbe l’élimination des substrats et est associée à des maladies de surcharge lysosomale, notamment la gangliosidose GM1 et la maladie de Morquio B, ce qui en fait un gène modèle utile pour l’étude du dysfonctionnement lysosomal. GLB1 est donc fréquemment étudié dans le contexte des réponses au stress liées à la neurodégénérescence, du remodelage métabolique et des conséquences cellulaires d’un traitement des glycannes déficient.
β-Gal Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GLB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GLB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GLB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GLB1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.