βENaC Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422826

Descripción general

Scnn1b codifica la subunidad β murina del canal epitelial de sodio (βENaC), un componente esencial de la captación de Na⁺ sensible a la amilorida a través de las membranas apicales de las células epiteliales. Junto con las subunidades α y γ, βENaC contribuye a regular el transporte transepitelial de sodio, la hidratación del líquido de superficie de las vías respiratorias y la fisiología de la barrera epitelial. La actividad de ENaC está estrictamente regulada por la activación proteolítica, el tráfico de membrana y el recambio dependiente de ubiquitina a través de la vía NEDD4L, lo que vincula a Scnn1b con la homeostasis iónica y las respuestas epiteliales al estrés. La alteración de la función de ENaC se estudia ampliamente en modelos de obstrucción de moco en las vías respiratorias y deterioro del aclaramiento mucociliar, así como en el manejo renal del sodio y la regulación de la presión arterial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO βENaC (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Scnn1b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Scnn1b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Scnn1b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína βENaC.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Scnn1b para la investigación de la señalización de βENaC, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Scnn1b críticos para la función de βENaC
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Scnn1b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido βENaC CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido βENaC CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Scnn1b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR βENaC (m) y el plásmido HDR βENaC (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Scnn1b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Scnn1b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.