β-defensin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419980

Übersicht

Defb1 kodiert Maus-β-Defensin 1, ein kleines kationisches antimikrobielles Peptid, das von Epithelzellen produziert wird und an Barriereoberflächen wie den Atemwegen sowie dem Gastrointestinal- und Urogenitaltrakt angereichert ist. β-Defensin 1 trägt zur angeborenen Immunabwehr durch direkte mikrobizide Aktivität und durch die Prägung der Zusammensetzung des mukosalen Mikrobioms bei und fungiert zugleich als Immunmodulator, der die Rekrutierung von Leukozyten und die Zytokinsignalgebung beeinflussen kann. Seine Expression ist mit Programmen der epithelialen Differenzierung und mit Entzündungsantworten verknüpft, wodurch Defb1 mit Prozessen in Verbindung steht, die die Barriereintegrität und Wirt–Erreger-Interaktionen regulieren. Eine veränderte Defensin-Expression wurde in experimentellen Modellen mit einer erhöhten Anfälligkeit für Infektionen und mit entzündlichen Krankheitsphänotypen assoziiert, was seine Relevanz für Studien zur mukosalen Immunologie und epithelialen Homöostase unterstreicht.

Das β-defensin 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Defb1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Defb1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Defb1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die β-defensin 1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Defb1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der β-defensin 1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Defb1-Exone abzielen, die für die β-defensin 1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Defb1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom β-defensin 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom β-defensin 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Defb1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das β-defensin 1 HDR-Plasmid (m) und β-defensin 1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Defb1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Defb1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.