β-casein Double Nickase Plasmid (h): sc-402248-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das β-casein Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- β-casein Double-Nickase-Plasmid (h) und β-casein Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CSN2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: β-casein: sc-53189
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
β-casein Double Nickase Plasmid (h) | sc-402248-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β-casein Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402248-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CSN2 kodiert das humane β‑Casein, ein wichtiges sezerniertes Phosphoprotein der Milch, das zur Bildung von Mizellen beiträgt und während der Laktation die Bereitstellung von Calcium, Phosphat und bioaktiven Peptiden unterstützt. Seine Expression wird im Mammaryepithel durch laktogene Hormonsignalwege streng reguliert, insbesondere durch die Prolaktin–JAK2/STAT5‑Achse, mit zusätzlichem Einfluss des Glukokortikoidrezeptors sowie von Insulin/PI3K‑Signalwegen, die Differenzierung und sekretorische Funktion koordinieren. Eine veränderte Regulation von β‑Casein wird häufig als Ausleseparameter für den Differenzierungszustand mammärer Epithelzellen und für laktationsassoziierte Transkriptionsprogramme genutzt, wodurch CSN2 ein nützlicher molekularer Marker in Studien zur Entwicklung der Milchdrüse und zur endokrinen Kontrolle der Genexpression ist. Fehlregulierte Netzwerke von Milchprotein‑Genen, einschließlich CSN2, werden oft in Kontexten wie einer beeinträchtigten Laktationsphysiologie und Verschiebungen in epithelialen Linienprogrammen untersucht, die für die Brustbiologie‑Forschung relevant sind.
β-casein Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CSN2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CSN2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CSN2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CSN2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.