β-Amyloid Lentiviral Activation Particles (h): sc-400520-LAC

APP kodiert das Amyloid‑Vorläuferprotein, ein Typ‑I‑transmembranäres Glykoprotein, das nacheinander durch α‑, β‑ und γ‑Sekretasen prozessiert wird und dabei mehrere bioaktive Fragmente erzeugt, darunter β‑Amyloid‑Peptide. Der Transport von APP durch das sekretorische sowie das endo‑lysosomale System verknüpft es mit Membranumsatz, synaptischer Funktion, Neuritenauswuchs und Zelladhäsion, während die sekretaseabhängige Spaltung die APP‑Biologie mit der regulierten intramembranären Proteolyse verbindet. Eine fehlregulierte amyloidogene Prozessierung und eine veränderte Aβ‑Homöostase sind zentrale molekulare Merkmale, die bei der Alzheimer‑Krankheit und der zerebralen Amyloidangiopathie untersucht werden; zudem wird die APP‑Expression auch im Kontext neuronaler Stressantworten und der Proteostase analysiert. In‑vitro‑Modelle untersuchen häufig Wechselwirkungen des APP‑Signalwegs mit dem Cholesterinstoffwechsel, der endosomalen Sortierung, der Autophagie‑Lysosom‑Funktion und inflammatorischer Signalgebung in glialen und neuronalen Zellen.

β-Amyloid Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente APP-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

β-Amyloid Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der APP-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen β-Amyloid-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen APP-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.