Plasmide CRISPR/Cas9 KO βA4-crystallin (m): sc-419824

Présentation

Cryba4 code la βA4‑cristalline, une cristalline structurale majeure du cristallin oculaire de la souris, qui contribue aux propriétés réfractives et à la transparence du cristallin à long terme. En tant que membre de la superfamille des β/γ‑cristallines, la βA4‑cristalline participe à la différenciation des cellules des fibres du cristallin et à la formation d’assemblages protéiques très ordonnés et étroitement compactés, qui maintiennent l’homogénéité optique. Sa stabilité et ses interactions au sein des réseaux de cristallines influencent des processus d’homéostasie protéique tels que le repliement assisté par des chaperonnes et la protection contre l’agrégation en conditions de stress oxydatif et de stress lié au vieillissement. Une perturbation ou une dérégulation de la composition en cristallines est associée à des phénotypes d’opacification du cristallin, ce qui fait de Cryba4 un locus pertinent pour l’étude des mécanismes liés à la cataracte et au développement oculaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO βA4-crystallin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cryba4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cryba4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cryba4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine βA4-crystallin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cryba4 pour l'étude de la signalisation de βA4-crystallin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cryba4 essentiels à la fonction de βA4-crystallin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cryba4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le βA4-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le βA4-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cryba4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le βA4-crystallin plasmide HDR (m) et le βA4-crystallin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cryba4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cryba4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.