β8 Tubulin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401438

Descripción general

TUBB8 codifica la tubulina β8, un isotipo de β-tubulina que polimeriza con la α-tubulina para formar microtúbulos, sosteniendo la arquitectura del citoesqueleto, el transporte intracelular y la dinámica del huso durante la división celular. La remodelación de los microtúbulos sustenta procesos como la mitosis, el posicionamiento de orgánulos y la polaridad celular mediante una regulación coordinada por proteínas asociadas a microtúbulos y modificaciones postraduccionales de la tubulina. Los cambios en la composición de isotipos de tubulina pueden influir en la estabilidad de los microtúbulos y en la sensibilidad al estrés dirigido a microtúbulos, vinculando la biología de la tubulina con defectos en la segregación cromosómica y la homeostasis celular. TUBB8 se ha estudiado en el contexto de fenotipos reproductivos y del desarrollo en los que la organización de los microtúbulos es crítica, proporcionando un modelo para desentrañar las contribuciones específicas de cada isotipo a la función microtubular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO β8 Tubulin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TUBB8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TUBB8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TUBB8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína β8 Tubulin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TUBB8 para la investigación de la señalización de β8 Tubulin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TUBB8 críticos para la función de β8 Tubulin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TUBB8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido β8 Tubulin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido β8 Tubulin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TUBB8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR β8 Tubulin (h) y el plásmido HDR β8 Tubulin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TUBB8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TUBB8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.