Plasmide CRISPR/Cas9 KO β4 Tubulin (h): sc-400058

Présentation

TUBB4A code la tubuline β4, un isotype de β-tubuline enrichi dans les neurones qui polymérise avec l’α-tubuline pour former des microtubules, soutenant l’architecture du fuseau mitotique, le transport intracellulaire et la croissance des neurites. Le renouvellement dynamique des microtubules sous-tend des processus tels que le transport axonal et le remodelage du cytosquelette, en s’intégrant à des voies qui coordonnent la progression du cycle cellulaire et la différenciation neuronale. Une altération de la fonction de TUBB4A perturbe l’assemblage et la stabilité des microtubules, reliant ce gène à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs dans les études génétiques. En tant que composant central du cytosquelette, la tubuline β4 offre un point d’entrée mécanistique pour étudier la signalisation dépendante des microtubules et la vulnérabilité au stress du cytosquelette dans des modèles de cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO β4 Tubulin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TUBB4A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TUBB4A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TUBB4A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine β4 Tubulin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TUBB4A pour l'étude de la signalisation de β4 Tubulin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TUBB4A essentiels à la fonction de β4 Tubulin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TUBB4A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le β4 Tubulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le β4 Tubulin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TUBB4A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le β4 Tubulin plasmide HDR (h) et le β4 Tubulin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TUBB4A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TUBB4A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.