β3Gn-T3 Double Nickase Plasmid (m): sc-428303-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das β3Gn-T3 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- β3Gn-T3 Double-Nickase-Plasmid (m) und β3Gn-T3 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf B3gnt3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
β3Gn-T3 Double Nickase Plasmid (m) | sc-428303-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β3Gn-T3 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-428303-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
B3gnt3 kodiert β3Gn-T3, eine β-1,3‑N‑Acetylglucosaminyltransferase, die im Golgi-Apparat zur Verlängerung von Poly‑N‑Acetyllactosamin auf Glykoproteinen und Glykolipiden beiträgt. Durch die Ausprägung der Verzweigung sowie der terminalen Strukturen von N‑ und O‑Glykanen beeinflusst β3Gn‑T3 lektinvermittelte Interaktionen, Zell‑Zell‑Adhäsion und den Rezeptortransport, die die Immun- und Epithelbiologie prägen. Eine veränderte Glykosyltransferase‑Aktivität kann das Glykom der Zelloberfläche umgestalten und dadurch Signalisierungsschwellen sowie inflammatorische Signale beeinflussen, was für Modelle von Infektionen, mukosaler Homöostase und tumorassoziierten Veränderungen der Glykosylierung relevant ist. In Mausmodellen wird eine Störung von B3gnt3 eingesetzt, um zu untersuchen, wie die Glykanverlängerung die Ligandenerkennung und die nachgeschaltete Aktivierung von Signalwegen reguliert.
β3Gn-T3 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des B3gnt3-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von B3gnt3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die B3gnt3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit B3gnt3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.