Plasmide CRISPR d'Activation (h) β3Gn-T1: sc-411554-ACT

B4GAT1 code la β3Gn‑T1, une glycosyltransférase qui soutient la synthèse et le remodelage des glycoconjugués en catalysant des réactions de transfert de N‑acétylglucosamine en β1,3, contribuant ainsi à l’allongement des chaînes glycanes. Par son rôle dans la glycosylation des protéines et des lipides, la β3Gn‑T1 influence le trafic membranaire, l’organisation des récepteurs et les interactions avec la matrice extracellulaire, qui façonnent la communication cellule‑cellule et la signalisation dépendante de l’adhésion. Des programmes de glycosylation altérés impliquant B4GAT1 ont été étudiés dans des contextes de régulation du développement et de modifications de la composition des glycannes associées aux maladies, où des changements des glycoprotéines de surface peuvent affecter la reconnaissance immunitaire et les réseaux de signalisation. Ces propriétés font de B4GAT1 une cible utile pour étudier la modulation de voies dépendantes de la glycosylation et des phénotypes liés aux glycannes de surface cellulaire.

β3Gn-T1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de B4GAT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

β3Gn-T1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus B4GAT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription B4GAT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de β3Gn-T1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus B4GAT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de β3Gn-T1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie β3Gn-T1 dans les cellules tumorales présentant une expression de B4GAT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.