β2C Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400056

Übersicht

TUBB4B kodiert β2C-Tubulin, einen zentralen Bestandteil von α/β-Tubulin-Heterodimeren, die zu Mikrotubuli polymerisieren und so die zytoskelettale Architektur, den intrazellulären Transport und den Aufbau des mitotischen Spindelapparats unterstützen. Die dynamische Umgestaltung von Mikrotubuli liegt Prozessen wie Zellzyklusprogression, Organellenpositionierung und Ziliogenese zugrunde und ist mit Signalwegen verknüpft, die Polarität und Stressantworten steuern. Ein verändertes Gleichgewicht von Tubulin-Isotypen und eine veränderte Mikrotubuli-Dynamik werden häufig mit proliferativen Phänotypen, chromosomaler Instabilität und Veränderungen des Migrationsverhaltens in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht. Als struktureller und regulatorischer Knotenpunkt der mikrotubuliabhängigen Zellbiologie ist β2C-Tubulin ein nützliches Ziel, um die zytoskelettale Kontrolle von Zellteilung und Transportprozessen zu untersuchen.

Das β2C Tubulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TUBB4B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TUBB4B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TUBB4B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die β2C Tubulin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TUBB4B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der β2C Tubulin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TUBB4B-Exone abzielen, die für die β2C Tubulin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TUBB4B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom β2C Tubulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom β2C Tubulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TUBB4B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das β2C Tubulin HDR-Plasmid (h) und β2C Tubulin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TUBB4B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TUBB4B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.