Particules Lentivirales d'Activation (h) β-2-Microglobulin: sc-417704-LAC

B2M code la β‑2‑microglobuline, la chaîne légère invariante des complexes du CMH de classe I, nécessaire au repliement correct, à la stabilité et à la présentation à la surface cellulaire des HLA de classe I. En permettant l’affichage des peptides aux lymphocytes T CD8+, la β‑2‑microglobuline soutient les voies de traitement et de présentation de l’antigène et influence la surveillance immunitaire, la reconnaissance par les cellules NK et les réponses régulées par les interférons. Des altérations de l’expression ou de la fonction de B2M sont fréquemment étudiées dans les mécanismes d’échappement immunitaire, les défauts de présentation antigénique et la signalisation inflammatoire. Dans les systèmes modèles humains, B2M constitue un nœud clé pour étudier la biologie des HLA de classe I, l’immunopeptidomique et les interactions entre cellules tumorales ou infectées et populations effectrices du système immunitaire.

Les particules d'activation lentivirales β-2-Microglobulin (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de B2M dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales β-2-Microglobulin (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription B2M, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de β-2-Microglobulin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif B2M ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.