Plasmide CRISPR/Cas9 KO β2-Adaptin (m): sc-428053

Présentation

Ap2b1 code la sous-unité β2-adaptine du complexe adaptateur AP-2, un composant central de l’endocytose médiée par la clathrine dans les cellules de souris. La β2-adaptine contribue à coupler la sélection des cargos à la membrane plasmique à l’assemblage du manteau de clathrine, en coordonnant l’internalisation et le recyclage des récepteurs, des transporteurs et des complexes de signalisation. Par ces fonctions, AP-2 influence des voies dépendantes du trafic membranaire telles que la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase, le cycle des vésicules synaptiques et la dynamique du cytosquelette. La perturbation du trafic médié par AP-2 est largement pertinente pour les études en neurobiologie, en métabolisme et sur les réseaux de signalisation oncogéniques, où une altération du renouvellement des récepteurs et du tri endosomal peut remodeler les réponses d’état cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO β2-Adaptin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ap2b1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ap2b1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ap2b1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine β2-Adaptin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ap2b1 pour l'étude de la signalisation de β2-Adaptin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ap2b1 essentiels à la fonction de β2-Adaptin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ap2b1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le β2-Adaptin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le β2-Adaptin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ap2b1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le β2-Adaptin plasmide HDR (m) et le β2-Adaptin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ap2b1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ap2b1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.