β1 Tubulin Double Nickase Plasmid (h): sc-400113-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das β1 Tubulin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- β1 Tubulin Double-Nickase-Plasmid (h) und β1 Tubulin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TUBB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: β1 Tubulin: sc-517652
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
β1 Tubulin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400113-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β1 Tubulin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400113-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBB1 kodiert das humane β1‑Tubulin, eine in Zellen der hämatopoetischen Linie angereicherte β‑Tubulin‑Isoform, die zusammen mit α‑Tubulinen zu Mikrotubuli polymerisiert, welche für die Organisation des Zytoskeletts und den intrazellulären Transport essenziell sind. In Megakaryozyten und Thrombozyten unterstützt β1‑Tubulin die Proplättchenbildung, die Formveränderung der Thrombozyten und die Integrität des Mikrotubuli‑Rings und ist damit mit Zytoskelettdynamik, Vesikeltransport und Prozessen der Zellteilung verknüpft. Störungen der Mikrotubuli‑Assemblierung oder der β1‑Tubulin‑Expression können die Megakaryopoese und die Thrombozytenbildung beeinträchtigen; zudem sind TUBB1‑Varianten mit erblichen Thrombozytenerkrankungen und veränderten Phänotypen der Thrombozytenfunktion assoziiert. Als struktureller Bestandteil des Mikrotubuli‑Netzwerks ist β1‑Tubulin auch für Studien zur Organisation der mitotischen Spindel, zum zytoskelettalen Remodeling sowie zu Genotyp‑Phänotyp‑Beziehungen in hämatologischen Krankheitsmodellen relevant.
β1 Tubulin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TUBB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TUBB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TUBB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TUBB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.