β-1,4-Gal-T4 Double Nickase Plasmid (h): sc-407251-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das β-1,4-Gal-T4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- β-1,4-Gal-T4 Double-Nickase-Plasmid (h) und β-1,4-Gal-T4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf B4GALT4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
β-1,4-Gal-T4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407251-NIC | 20 µg | $410.00 |
B4GALT4 kodiert die humane β-1,4-Galactosyltransferase 4 (β-1,4-Gal-T4), eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glycosyltransferase, die Galactose auf N-Acetylglucosamin überträgt und dadurch β1,4-verknüpfte galactosylierte Glykane auf Glykoproteinen und Glykolipiden erzeugt. Über ihren Beitrag zur N-Glykan-Prozessierung und zur Verlängerung von Lactosamin beeinflusst β-1,4-Gal-T4 den glykanabhängigen Proteintransport, die Organisation von Rezeptoren an der Zelloberfläche sowie lektinvermittelte Zell-Zell-Interaktionen. Veränderte β1,4-Galactosylierung wird häufig im Kontext fehlregulierter Glycosylierungsprogramme untersucht, die Signalübertragung, Adhäsion und Immunerkennung in krankheitsassoziierten zellulären Zuständen prägen. B4GALT4 ist daher relevant für mechanistische Untersuchungen von Golgi-Glycosylierungswegen und dafür, wie Glykan-Remodeling den zellulären Phänotyp beeinflusst.
β-1,4-Gal-T4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des B4GALT4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von B4GALT4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die B4GALT4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit B4GALT4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.