β-1,4-Gal-T1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403299-ACT

B4GALT1 kodiert das humane β-1,4-Gal-T1, eine im Golgi-Apparat lokalisierte β1,4-Galactosyltransferase, die Galactose auf N-Acetylglucosamin überträgt und dadurch N-Acetyllactosamin-Motive auf N- und O-verknüpften Glykanen sowie auf Glycosphingolipiden erzeugt. Diese Aktivität ist zentral für die Verzweigung und Reifung von Glykanen innerhalb des sekretorischen Weges und beeinflusst Proteinfaltung, Transport und die Präsentation von Glykanen auf der Zelloberfläche. Durch die Formung glykosylierungsabhängiger Interaktionen wirkt β-1,4-Gal-T1 auf Zelladhäsion, Rezeptorsignalgebung und Prozesse der Immunerkennung. Eine fehlregulierte, B4GALT1-abhängige Glykosylierung wurde mit veränderter Glykoproteinfunktion und krankheitsrelevanten Phänotypen in Kontexten von Entzündung, Krebsbiologie und der Forschung zu kongenitalen Störungen der Glykosylierung in Verbindung gebracht.

β-1,4-Gal-T1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen B4GALT1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

β-1,4-Gal-T1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des B4GALT1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der B4GALT1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen β-1,4-Gal-T1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native B4GALT1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von β-1,4-Gal-T1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des β-1,4-Gal-T1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem B4GALT1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.