α1D-AR Double Nickase Plasmid (h): sc-402904-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α1D-AR Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α1D-AR Double-Nickase-Plasmid (h) und α1D-AR Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ADRA1D abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: α1D-AR: sc-390884
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α1D-AR Double Nickase Plasmid (h) | sc-402904-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α1D-AR Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402904-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADRA1D kodiert den humanen α1D‑adrenergen Rezeptor (α1D‑AR), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der bevorzugt über Gq/11 signalisiert, um die Phospholipase C zu aktivieren, die intrazelluläre Ca2+-Konzentration zu erhöhen und PKC‑abhängige Transkriptionsprogramme zu stimulieren. Der α1D‑AR trägt zur Kontraktilität glatter Muskulatur und zum Gefäßtonus bei und moduliert nachgeschaltete MAPK/ERK‑Signalwege, die Aktivität von Ionenkanälen sowie Ca2+-abhängige Genexpression. Die Rezeptoraktivität integriert Katecholamin‑Signale in autonomen Signalnetzwerken und kann zelluläre Proliferations‑ und Remodeling‑Programme in ansprechenden Geweben beeinflussen. Eine fehlregulierte adrenerge Signalübertragung unter Beteiligung von ADRA1D wurde in der kardiovaskulären und urogenitalen Physiologie untersucht sowie in breiteren Kontexten, in denen GPCR‑getriebene Ca2+-Signale Entzündungen und Zellzustandsübergänge beeinflussen.
α1D-AR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ADRA1D-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ADRA1D abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ADRA1D-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ADRA1D-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.