α_1B-AR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419020

Descripción general

Adra1b codifica el receptor adrenérgico α1B (α1B-AR) del ratón, un receptor acoplado a proteína G que se acopla preferentemente a Gq/11 para estimular la señalización de la fosfolipasa Cβ, aumentando la liberación de Ca2+ mediada por IP3 y la activación de PKC dependiente de diacilglicerol. A través de estas vías, el α1B-AR regula el tono del músculo liso, la neurotransmisión y la excitabilidad celular, y puede activar programas posteriores de MAPK/ERK que influyen en la expresión génica y en respuestas adaptativas. En contextos neuronales y cardiovasculares, la señalización de los receptores adrenérgicos se cruza con los circuitos de respuesta al estrés y la regulación autonómica, vinculando Adra1b con fenotipos relevantes para la hipertensión, rasgos neuropsiquiátricos y la desregulación adrenérgica en modelos de enfermedad. El análisis de la función del α1B-AR respalda estudios mecanísticos del sesgo de señalización en GPCR, la comunicación cruzada entre receptores y el control transcripcional dependiente de calcio.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO α1B-AR (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Adra1b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Adra1b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Adra1b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína α1B-AR.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Adra1b para la investigación de la señalización de α1B-AR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Adra1b críticos para la función de α1B-AR
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Adra1b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido α1B-AR CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido α1B-AR CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Adra1b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR α1B-AR (m) y el plásmido HDR α1B-AR (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Adra1b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Adra1b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.