α_1A-AR Double Nickase Plasmid (h): sc-401726-NIC

ADRA1A kodiert den humanen alpha1A-adrenergen Rezeptor (α1A-AR), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der vorwiegend an Gq/11 koppelt und dadurch die Phospholipase‑C‑Signalgebung, eine inositoltrisphosphatabhängige Ca2+-Mobilisierung sowie die Aktivierung der Proteinkinase C stimuliert. Über diese Signalwege reguliert α1A‑AR die Kontraktion glatter Muskulatur, den Gefäßtonus und die Neurotransmission, mit nachgeschalteten Effekten auf die MAPK/ERK‑Signalgebung und umfassendere transkriptionelle Antworten. Das Gleichgewicht von ADRA1A‑Expression und ‑Signalübertragung trägt zur adrenergen Kontrolle der kardiovaskulären und urogenitalen Physiologie bei; eine Fehlregulation ist für Erkrankungen relevant, die mit veränderter sympathischer Signalgebung und Gewebeumbau einhergehen. Als zelloberflächlicher GPCR mit gut definierten Second‑Messenger‑Outputs wird er häufig genutzt, um Rezeptordesensibilisierung, biased signaling und Cross‑Talk mit anderen GPCR‑ und Wachstumsfaktor‑Signalwegen zu untersuchen.

α1A-AR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ADRA1A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ADRA1A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ADRA1A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ADRA1A-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.