Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
α1A-AR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401726
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- α1A-AR El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico α1A-AR, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: α1A-AR Anticuerpo (4D8): sc-100291
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
α1A-AR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401726 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
ADRA1A codifica el receptor adrenérgico humano α1A (α1A-AR), un receptor acoplado a proteína G que se acopla preferentemente a Gq/11 para activar la fosfolipasa C, aumentar el Ca2+ intracelular y estimular la señalización dependiente de PKC. El α1A-AR regula la contracción del músculo liso, el tono vascular y la neurotransmisión, y puede activar vías MAPK/ERK aguas abajo que influyen en la proliferación celular y en programas de transcripción. La actividad del receptor contribuye al control adrenérgico de la fisiología cardiovascular y genitourinaria, y modula redes de señalización sensibles al estrés en múltiples tejidos. La señalización adrenérgica desregulada y los cambios en la expresión de ADRA1A se han investigado en contextos como la hipertensión, la función del tracto urinario inferior y la señalización del microambiente tumoral, lo que ofrece un punto de entrada mecanístico para investigaciones centradas en vías de señalización.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO α1A-AR (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ADRA1A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ADRA1A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ADRA1A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína α1A-AR.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ADRA1A para la investigación de la señalización de α1A-AR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de ADRA1A críticos para la función de α1A-AR
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ADRA1A para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido α1A-AR CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido α1A-AR CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ADRA1A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR α1A-AR (h) y el plásmido HDR α1A-AR (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ADRA1A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ADRA1A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.