α-sarcoglycan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422904
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- α-sarcoglycan Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im α-sarcoglycan-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: α-sarcoglycan: sc-271321
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α-sarcoglycan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-422904 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Sgca kodiert α‑Sarkoglykan, eine zentrale transmembrane Komponente des Sarkoglykan‑Komplexes innerhalb des Dystrophin‑Glykoprotein‑Komplexes, der das Sarkolemm stabilisiert und die Kraftübertragung in Skelett- und Herzmuskel unterstützt. Durch die Verbindung der extrazellulären Matrix mit dem Zytoskelett trägt α‑Sarkoglykan zur Membranintegrität und zur Mechanotransduktion während der Kontraktion bei und schützt Muskelfasern vor kontraktionsbedingten Schäden. Eine Störung von Sgca beeinträchtigt den Zusammenbau des dystrophinassoziierten Proteinkomplexes und kompromittiert die Stabilität der Muskelfasern, was eine molekulare Grundlage für muskeldystrophieähnliche Phänotypen in Modellsystemen liefert. Maus‑Sgca ist daher ein wichtiges Ziel zur Untersuchung der sarcolemmalen Adhäsionssignalgebung, von Programmen der Muskeldegeneration/-regeneration sowie nachgeschalteter entzündlicher und fibrotischer Umbauwege.
Das α-sarcoglycan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sgca-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sgca-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sgca nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die α-sarcoglycan-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sgca-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der α-sarcoglycan-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Sgca-Exone abzielen, die für die α-sarcoglycan-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sgca-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom α-sarcoglycan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom α-sarcoglycan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sgca-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das α-sarcoglycan HDR-Plasmid (m) und α-sarcoglycan HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sgca-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sgca-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.