α-KGD Double Nickase Plasmid (h): sc-402915-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α-KGD Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α-KGD Double-Nickase-Plasmid (h) und α-KGD Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf OGDH abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α-KGD Double Nickase Plasmid (h) | sc-402915-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α-KGD Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402915-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Human OGDH kodiert die E1‑Komponente des 2‑Oxoglutarat‑Dehydrogenase‑Komplexes (α‑KGD), eines geschwindigkeitsbestimmenden Enzyms des Tricarbonsäurezyklus (TCA‑Zyklus), das α‑Ketoglutarat zu Succinyl‑CoA umsetzt und dabei NADH erzeugt. Diese Reaktion verknüpft den mitochondrialen Kohlenstofffluss mit dem zellulären Redoxgleichgewicht und unterstützt über den α‑Ketoglutarat‑Knoten die oxidative Phosphorylierung, die Anaplerose und den Aminosäurestoffwechsel. Die OGDH‑Aktivität koppelt den mitochondrialen Stoffwechsel zudem über die NADH‑Produktion und den nachgeschalteten Elektronentransport an den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies und an Stressantworten. Eine Fehlregulation von OGDH/α‑KGD‑assoziierten Signal- und Stoffwechselwegen wird mit metabolischen Umbauprozessen in neurologischen Erkrankungen sowie mit der bioenergetischen Anpassung bei Krebs in Verbindung gebracht und macht OGDH zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der mitochondrialen Funktion.
α-KGD Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des OGDH-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von OGDH abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die OGDH-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit OGDH-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.