Particules Lentivirales d'Activation (h) αENaC: sc-401123-LAC

SCNN1A code la sous-unité alpha du canal sodique épithélial humain (αENaC), un composant formant le pore du complexe ENaC sensible à l’amiloride, qui assure l’entrée électrogénique de Na⁺ à travers les membranes apicales des tissus épithéliaux. En contrôlant l’absorption du sodium et son couplage au mouvement osmotique de l’eau, αENaC contribue à l’homéostasie du liquide de surface des voies aériennes, à la réabsorption tubulaire rénale du sodium et à la régulation du volume épithélial. L’activité d’ENaC est modulée par un processing protéolytique, par un trafic dépendant de l’ubiquitine via NEDD4L et par des voies de signalisation hormonale, notamment SGK1 régulée par l’aldostérone, reliant ainsi SCNN1A au transport ionique et à la physiologie de la barrière épithéliale. Une dérégulation de la gestion du sodium médiée par ENaC est associée à des troubles de l’équilibre hydro-sodé et a été étudiée dans le cadre de phénotypes d’hydratation des voies aériennes et d’anomalies rénales des électrolytes.

Les particules d'activation lentivirales αENaC (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SCNN1A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales αENaC (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SCNN1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de αENaC. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SCNN1A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.