Plásmido Doble Nickase (h) α E-catenin: sc-401151-NIC

CTNNA1 codifica la α E-catenina humana, un componente central de las uniones adherentes que conecta los complejos cadherina–β-catenina con el citoesqueleto de actina para estabilizar la adhesión célula–célula y regular la tensión cortical. Al coordinar la remodelación de las uniones con la dinámica actomiosínica, la α E-catenina contribuye a la polaridad epitelial, la morfogénesis tisular y el control del comportamiento celular dependiente del contacto. La función de CTNNA1 se entrecruza con vías que gobiernan la organización del citoesqueleto y la señalización en las uniones, incluida la comunicación cruzada con la regulación de Wnt/β-catenina en la membrana y en las salidas transcripcionales. La actividad o expresión alteradas de CTNNA1 se han asociado con defectos de adhesión y fenotipos relevantes para la invasión en biología del cáncer, así como con cambios en la integridad epitelial pertinentes a contextos del desarrollo y hematológicos.

α E-catenin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CTNNA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CTNNA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CTNNA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CTNNA1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.