α-defensin 5 Double Nickase Plasmid (h): sc-404991-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α-defensin 5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α-defensin 5 Double-Nickase-Plasmid (h) und α-defensin 5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DEFA5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: α-defensin 5: sc-53997
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α-defensin 5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404991-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α-defensin 5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404991-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DEFA5 kodiert das humane α-Defensin 5, ein kationisches antimikrobielles Peptid, das überwiegend von Paneth-Zellen im Dünndarm produziert und als Teil der angeborenen mukosalen Immunität in das Darmlumen abgegeben wird. Nach proteolytischer Prozessierung stört α-Defensin 5 mikrobielle Membranen und prägt die Zusammensetzung der Darmmikrobiota, während es zugleich die Funktion der epithelialen Barriere und Programme der Wirtsabwehr unterstützt. Seine Expression ist mit der Differenzierung von Paneth-Zellen und der Biologie sekretorischer Granula verknüpft und steht in Verbindung mit inflammatorischer Signalgebung sowie mikrobiellen Erkennungswegen, die die intestinale Homöostase regulieren. Veränderte DEFA5-Spiegel und eine Dysfunktion der Paneth-Zellen wurden mit entzündlichen Darmerkrankungen und einer erhöhten Anfälligkeit für enterale Infektionen in Zusammenhang gebracht, was DEFA5 zu einem nützlichen Marker und funktionellen Knotenpunkt in der mukosalen Immunologieforschung macht.
α-defensin 5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DEFA5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DEFA5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DEFA5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DEFA5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.