Plasmide CRISPR/Cas9 KO α-actinin-4 (h2): sc-400548-KO-2

Présentation

ACTN4 code l’α-actinine-4, une protéine de réticulation des filaments d’actine insensible au calcium, qui se localise aux adhérences focales, aux fibres de stress et aux jonctions cellule–cellule afin de réguler l’architecture du cytosquelette et la signalisation mécanique. En organisant les réseaux de F‑actine et en les reliant à des complexes associés aux intégrines, l’α-actinine-4 contribue à l’adhésion, à l’étalement et à la migration cellulaires, ainsi qu’aux modifications de la rigidité cellulaire qui influencent des voies telles que la signalisation des GTPases Rho et la mécanotransduction. Outre ses rôles cytoplasmiques, l’α-actinine-4 a également été impliquée dans des fonctions nucléaires, notamment la modulation de programmes transcriptionnels via des interactions protéine–protéine. Une expression dérégulée d’ACTN4 ou des mutations de ce gène ont été associées à des dysfonctionnements des podocytes rénaux (notamment la glomérulosclérose segmentaire et focale) ainsi qu’à des phénotypes invasifs dans plusieurs types de tumeurs, ce qui souligne son intérêt pour l’étude du contrôle du cytosquelette et de comportements cellulaires liés à la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α-actinin-4 (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ACTN4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ACTN4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ACTN4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α-actinin-4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ACTN4 pour l'étude de la signalisation de α-actinin-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ACTN4 essentiels à la fonction de α-actinin-4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ACTN4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le α-actinin-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le α-actinin-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ACTN4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le α-actinin-4 plasmide HDR (h) et le α-actinin-4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ACTN4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ACTN4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.