αA-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419820

Übersicht

Cryaa kodiert αA‑Kristallin, ein im Augenlinsengewebe sehr reichlich vorhandenes kleines Hitzeschockprotein, das als ATP‑unabhängiger molekularer Chaperon wirkt, um die Löslichkeit von Kristallinen zu erhalten und unter Stress Proteinaggregation zu verhindern. Über seine strukturelle Rolle bei der Herstellung der Linsentransparenz und der Brechungseigenschaften hinaus trägt αA‑Kristallin zur Proteostase bei, indem es mit fehlgefalteten Zielproteinen interagiert und Stressantwort-Netzwerke moduliert, die mit Redox-Gleichgewicht und Apoptose verknüpft sind. Eine veränderte CRYAA‑Expression oder ‑Funktion ist mit Störungen der Linsenfaserzellen, einer beeinträchtigten Protein-Homöostase und kataraktassoziierten Phänotypen verbunden und stellt damit einen zentralen Ansatzpunkt für die Untersuchung der Linsenentwicklung und altersabhängiger Proteinaggregationsprozesse dar. In Mausmodellen ermöglicht eine Perturbation von Cryaa mechanistische Untersuchungen zur Chaperonaktivität, zur Organisation des Zytoskeletts und zur Stressresistenz in Linsenepithel- und Linsenfaserzellen.

Das αA-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cryaa-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cryaa-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cryaa nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die αA-crystallin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cryaa-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der αA-crystallin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cryaa-Exone abzielen, die für die αA-crystallin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cryaa-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom αA-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom αA-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cryaa-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das αA-crystallin HDR-Plasmid (m) und αA-crystallin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cryaa-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cryaa-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.