α8 Tubulin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400076-ACT

TUBA8 codifica l’α8 tubulina, un membro della famiglia delle α-tubuline che eterodimerizza con la β-tubulina per formare i microtubuli, sostenendo l’architettura del citoscheletro, il trasporto intracellulare e l’organizzazione del fuso mitotico. Attraverso la regolazione della dinamica dei microtubuli, l’α8 tubulina contribuisce a processi quali la divisione cellulare, la polarità e il traffico vescicolare, interagendo con le proteine associate ai microtubuli e con i complessi motori. L’alterazione dell’espressione delle isofrome della tubulina e il rimodellamento dei microtubuli sono collegati a proliferazione disregolata e a un’organizzazione cellulare aberrante nelle patologie umane, rendendo TUBA8 un bersaglio utile per studi meccanicistici sul controllo del citoscheletro. TUBA8 è inoltre rilevante per indagare come la composizione della tubulina influenzi la stabilità dei microtubuli e le risposte di segnalazione alle perturbazioni del citoscheletro.

α8 Tubulin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TUBA8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

α8 Tubulin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TUBA8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TUBA8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di α8 Tubulin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TUBA8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da α8 Tubulin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via α8 Tubulin nelle cellule tumorali con espressione di TUBA8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.