α1a Tubulin Double Nickase Plasmid (h): sc-400022-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α1a Tubulin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α1a Tubulin Double-Nickase-Plasmid (h) und α1a Tubulin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TUBA1A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: α1a Tubulin: sc-134237
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α1a Tubulin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400022-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α1a Tubulin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400022-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBA1A kodiert α1a-Tubulin, einen zentralen Bestandteil von Mikrotubuli, die zu dynamischen Filamenten polymerisieren, die für die Bildung des mitotischen Spindelapparats, den intrazellulären Transport und die Aufrechterhaltung der Zellpolarität erforderlich sind. α1a-Tubulin unterstützt den Umbau des Zytoskeletts und mikrotubuliabhängige Prozesse über den gesamten Zellzyklus hinweg und ermöglicht so eine korrekte Chromosomentrennung und die neuronale Morphogenese. Eine veränderte TUBA1A-Funktion wird mit gestörter Mikrotubuli-Dynamik und einer abnormen kortikalen Entwicklung in Verbindung gebracht, was das Gen für Studien zu neuroentwicklungsbedingten Erkrankungen und zytoskelettaler Dysregulation relevant macht. Als eine der wichtigsten α-Tubulin-Isoformen beim Menschen wird es häufig eingesetzt, um Mikrotubuli-Assembly, -Stabilität und Interaktionen mit mikrotubuliassoziierten Proteinen sowie Motorkomplexen zu untersuchen.
α1a Tubulin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TUBA1A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TUBA1A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TUBA1A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TUBA1A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.