9230105E10Rik Aktivatoren

Gängige 9230105E10Rik Activators sind unter underem Forskolin CAS 66575-29-9, IBMX CAS 28822-58-4, PMA CAS 16561-29-8, Ionomycin CAS 56092-82-1 und (-)-Epigallocatechin Gallate CAS 989-51-5.

Die Bezeichnung 9230105E10Rik-Aktivatoren umfasst eine Klasse von Chemikalien, die die Aktivität des 9230105E10Rik-Gens induzieren können. Die Identifizierung solcher Aktivatoren beginnt in der Regel mit einer Hochdurchsatz-Screening-Strategie (HTS), einem methodischen Ansatz, der es ermöglicht, eine umfangreiche Bibliothek von Verbindungen auf ihre Fähigkeit zur Modulation der Genaktivität zu prüfen. Im Falle der 9230105E10Rik-Aktivatoren wird üblicherweise ein Reportergen-Assay verwendet. Dabei wird ein System entwickelt, bei dem ein leicht messbares Reportergen, das in der Regel für ein Fluoreszenz- oder Lumineszenzprotein kodiert, unter die Kontrolle des 9230105E10Rik-Genpromotors gestellt wird. Wenn Zellen, die dieses Konstrukt enthalten, verschiedenen chemischen Verbindungen ausgesetzt werden, führen diejenigen, die den Promotor aktivieren, zu einem Anstieg der Expression des Reportergens, der nachgewiesen und quantifiziert werden kann. Verbindungen, die eine deutliche Erhöhung der Reporteraktivität verursachen, werden als potenzielle Aktivatoren des 9230105E10Rik-Gens markiert. Diese primären Treffer werden dann für eine weitere Validierung ausgewählt, um ihre aktivierende Wirkung zu bestätigen.

Im Anschluss an das Hochdurchsatz-Screening wird die Hochregulierung des 9230105E10Rik-Gens durch die Aktivierungskandidaten mittels quantitativer PCR (qPCR) bestätigt und quantifiziert. Mit dieser Technik wird die Menge der vom 9230105E10Rik-Gen transkribierten mRNA nach der Interaktion mit den Substanzen gemessen. Ein beobachteter Anstieg der mRNA-Konzentration des Gens deutet darauf hin, dass die Verbindungen die Genexpression auf der Transkriptionsebene verstärken können. Um diese Ergebnisse mit der Proteinsynthese zu korrelieren, wird eine Western-Blot-Analyse durchgeführt. Bei dieser Technik werden die Proteine mittels Elektrophorese aus Zelllysaten abgetrennt, auf eine Membran übertragen und dann mit Antikörpern, die spezifisch für das 9230105E10Rik-Protein sind, untersucht. Ein nachweisbarer Anstieg der Intensität der Proteinbande im Western Blot im Vergleich zu den Kontrollen bestätigt die Fähigkeit der Substanz, nicht nur die mRNA-Spiegel, sondern auch die Expression des entsprechenden Proteins zu erhöhen. Zusammengenommen bieten diese molekularen Techniken einen robusten Rahmen für die Bewertung und Bestätigung der Aktivität chemischer Verbindungen als Aktivatoren des 9230105E10Rik-Gens und stellen sicher, dass die beobachteten Effekte auf eine echte Hochregulierung der Genexpression von der Transkription bis zur Proteinproduktion zurückzuführen sind.