A CIB3 pode iniciar uma série de eventos de sinalização intracelular através de vários mecanismos. O cloreto de cálcio, por exemplo, introduz iões de cálcio que se ligam diretamente ao domínio EF-hand da CIB3, um motivo conhecido pela coordenação de iões de cálcio. Este evento de ligação desencadeia uma alteração na conformação da proteína, permitindo-lhe participar ativamente nas vias de sinalização celular. Do mesmo modo, a ionomicina, enquanto ionóforo de cálcio, eleva os níveis de cálcio intracelular que pode ligar-se à CIB3, provocando potencialmente alterações estruturais que activam as suas funções de sinalização. A tapsigargina também desempenha um papel no aumento da concentração de cálcio citosólico, que pode interagir com a CIB3, levando à sua ativação através de alterações conformacionais induzidas pelo cálcio. Além disso, o BAY K8644, ao ativar os canais de cálcio do tipo L, aumenta o cálcio intracelular, o que pode levar à ativação da CIB3.
Outros activadores químicos influenciam a CIB3 através de mecanismos diferentes. O sulfato de zinco e o sulfato de magnésio fornecem iões de zinco e magnésio, respetivamente, que podem interagir com a proteína, possivelmente resultando em modificações estruturais que aumentam a atividade funcional da CIB3. O 12-miristato 13-acetato de forbol e o 12,13-didecanoato de 4-α-forbol, ambos ésteres de forbol, imitam o diacilglicerol e activam a proteína quinase C (PKC). A PKC, por sua vez, pode fosforilar a CIB3, levando à sua ativação. A forskolina aumenta os níveis de AMPc na célula, activando a proteína quinase A (PKA), que pode então ter como alvo a CIB3 para fosforilação, e o monofosfato de N6-Benzoiladenosina-3',5'-cíclico, um análogo do AMPc, também ativa a PKA, culminando potencialmente na fosforilação da CIB3. O fluoreto de sódio actua como um agente fosforilante, o que poderá levar à fosforilação direta da CIB3, alterando as suas capacidades de sinalização. Por último, o 1,2-Dioctanoil-sn-glicerol, um análogo sintético do DAG, ativa a PKC, que poderá fosforilar a CIB3, modulando assim o seu papel nas vias de sinalização celular.
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