Zyxin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402295-ACT

O gene humano ZYX codifica a zixina, uma proteína de suporte com domínio LIM em adesões focais que coordena a remodelação do citoesqueleto de actina e a mecanotransdução em locais de adesão mediada por integrinas. A zixina interage com VASP/EVL e α-actinina para sustentar a manutenção de fibras de stress, o espalhamento celular e a migração direcional, ligando sinais da matriz extracelular à contratilidade regulada por GTPases Rho e a programas responsivos a YAP/TAZ. Ao alternar entre complexos de adesão e o núcleo, a zixina pode influenciar respostas transcricionais ao stress mecânico e a perturbações do citoesqueleto. A expressão ou a localização desregulada de ZYX tem sido associada a sinalização de adesão alterada e fenótipos invasivos em modelos relacionados ao cancro, bem como a papéis mais amplos na remodelação tecidular, em que a dinâmica célula-matriz é crítica.

Zyxin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZYX sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Zyxin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZYX em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZYX, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Zyxin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZYX nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Zyxin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Zyxin em células tumorais com expressão de ZYX silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.