ZPR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409727-ACT

A ZPR1 humana (proteína dedo de zinco ZPR1) é um fator contendo dedos de zinco, expresso de forma ubíqua, que se liga a receptores tirosina-quinase e se associa a complexos de SMN para apoiar o metabolismo de RNA. Ela contribui para a manutenção da arquitetura nuclear e para a montagem de ribonucleoproteínas, influenciando programas transcricionais e processos ligados ao ciclo celular que moldam a proliferação e as respostas ao estresse. A função da ZPR1 cruza vias que governam o processamento de RNA e a expressão gênica dependente de sinais, tornando-a relevante para estudos de proteostase e vulnerabilidade neuronal. Alterações na expressão de ZPR1 têm sido associadas a fenótipos relacionados a neurônios motores e à biologia ligada ao SMN, apoiando a investigação de seu papel em mecanismos celulares relevantes para neurodegeneração, sem implicar desfechos clínicos.

ZPR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZPR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZPR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZPR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZPR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZPR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZPR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZPR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZPR1 em células tumorais com expressão de ZPR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.