ZPK CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404802-ACT

ヒトMAP3K12はZPK（DLKとしても知られる）をコードしており、JNKおよびp38 MAPKカスケードの上流で機能するMAPキナーゼキナーゼキナーゼとして、ストレス応答性の転写プログラムを制御します。ZPKは、軸索損傷、炎症性シグナル、細胞骨格の攪乱といった情報を統合し、神経細胞の分化、生存、変性に影響を及ぼします。とりわけ神経系において重要な役割を担います。下流のMAP2Kをリン酸化することにより、MAP3K12はアポトーシス、神経突起伸長、シナプス再構築の制御に関与します。ZPKシグナルの異常は神経変性や神経障害性疼痛の生物学と関連づけられており、MAP3K12はヒト細胞モデルにおけるキナーゼ駆動型ストレスシグナル伝達の解明に有用な結節点となります。

ZPK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAP3K12の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZPK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAP3K12 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAP3K12転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZPKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAP3K12遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZPK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAP3K12発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZPK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。