ZO-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401395

Visão geral

TJP2 codifica a proteína de andaime das junções estreitas ZO-2, membro da família MAGUK, que conecta as claudinas e a ocludina ao citoesqueleto de actina cortical, sustentando a integridade da barreira epitelial e endotelial. A ZO-2 também coordena a montagem das junções com vias de sinalização que regulam a polaridade e a proliferação, incluindo interações que influenciam a dinâmica das GTPases Rho e programas transcricionais associados às junções. Por meio de suas funções no controle da permeabilidade paracelular e na manutenção da organização ápico-basal, alterações na função de TJP2/ZO-2 são relevantes para estudos de disfunção de barreira e homeostase tecidual. A desregulação de componentes das junções estreitas, como a ZO-2, é frequentemente investigada em contextos de inflamação, fibrose e transformação epitelial, nos quais o remodelamento das junções e a perda de polaridade são marcantes.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ZO-2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TJP2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TJP2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TJP2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ZO-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TJP2 para a investigação da sinalização de ZO-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TJP2 críticos para a função ZO-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TJP2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ZO-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ZO-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TJP2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ZO-2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ZO-2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TJP2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TJP2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.