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ZIP7CRISPR激活质粒(h) | sc-409465-ACT | 20 µg | $397.00 |
SLC39A7 编码 ZIP7,这是一种定位于内质网和高尔基体的锌转运蛋白,通过调控细胞质中 Zn2+ 的释放来维持金属离子稳态。ZIP7 通过控制依赖锌的酶活性与信号传导,影响多种过程,包括分泌通路中的蛋白质折叠、内质网应激反应,以及与细胞增殖和存活相关的磷酸化级联反应。ZIP7 介导的锌通量发生扰动与多种疾病背景下的生长因子信号改变和细胞应激适应失调有关,其中包括与癌症相关的通路。作为锌信号传导的关键枢纽,ZIP7 常被用于研究其对转录程序、蛋白质稳态(proteostasis)以及代谢重编程的影响。
ZIP7 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC39A7的表达。
ZIP7 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SLC39A7基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SLC39A7转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ZIP7表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SLC39A7位点,并能够研究内源性位点上依赖于ZIP7的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC39A7表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ZIP7通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。