ZFYVE27 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407267-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ZFYVE27 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ZFYVE27ダブルニカースプラスミド（h）およびZFYVE27ダブルニカースプラスミド（h2）は、ZFYVE27を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ZFYVE27 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-407267-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ZFYVE27 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-407267-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZFYVE27（別名protrudin）は、ホスファチジルイノシトール3-リン酸に結合するFYVEドメイン含有タンパク質をコードしており、エンドソーム膜と会合して膜輸送を協調的に制御します。Rab GTPアーゼ、キネシンモーター、ER–エンドソーム接触部位の構成因子との相互作用を介して、エンドソームから細胞膜への輸送、神経突起の伸長、微小管依存的な小胞動態に関与します。エンドソームでのソーティングと極性輸送を結び付けることで、ZFYVE27は神経細胞の形態形成や軸索維持に関わる経路に影響を与えます。ZFYVE27に関連する輸送の異常は、遺伝性痙性対麻痺に関連する機序を含む神経変性様の表現型と関連付けられており、軸索障害や細胞内輸送欠陥の研究において重要です。
ZFYVE27 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ZFYVE27 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ZFYVE27内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ZFYVE27の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ZFYVE27が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。