ZFP100 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411821-ACT

ヒトのZNF473は、C2H2型ジンクフィンガードメインを特徴とする、推定DNA結合性の転写調節因子であるジンクフィンガータンパク質ZFP100をコードしています。ZFP100はプロモーターおよびエンハンサー活性を調節することで、細胞のアイデンティティ、ストレス応答、分化関連経路を形作るクロマチン依存的な転写プログラムに影響を与えると考えられます。ジンクフィンガー型転写因子の調節異常は、エピジェネティック状態の破綻やシグナル伝達ネットワークの異常としばしば関連するため、ZNF473は疾患関連の文脈における転写制御機構を研究する上で有用な遺伝子座です。ZFP100依存的な遺伝子ネットワークを解明することは、経路リモデリング、制御エレメント機能、ヒト細胞におけるトランスクリプトーム変化の研究を支援します。

ZFP100 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZNF473の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZFP100 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZNF473 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZNF473転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZFP100の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZNF473遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZFP100依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZNF473発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZFP100経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。