ZBTB2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412860-ACT

ZBTB2 (zinc finger and BTB domain containing 2) codifica um fator de transcrição com domínio BTB/POZ e múltiplos dedos de zinco C2H2, que medeia a ligação ao DNA de forma específica à sequência e interações proteína–proteína. Em células humanas, o ZBTB2 está implicado em programas de repressão/ativação transcricional que coordenam a remodelação da cromatina e a expressão gênica específica de linhagem, incluindo vias que governam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e a manutenção da identidade celular. Como proteína reguladora nuclear, alterações na atividade do ZBTB2 podem perturbar redes transcricionais do desenvolvimento e o estado epigenético, tornando-o relevante para estudos mecanísticos da proliferação e diferenciação desreguladas observadas em diversos modelos de doença. Sua posição nos circuitos entre fatores de transcrição e reguladores de cromatina sustenta seu uso como um nó para investigar redes de regulação gênica e dependências de vias a montante/a jusante.

ZBTB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZBTB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZBTB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZBTB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZBTB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZBTB2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZBTB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZBTB2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZBTB2 em células tumorais com expressão de ZBTB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.