ZBP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425482-ACT

O gene **Zbp1** de camundongo codifica a **proteína 1 de ligação a Z-DNA/RNA (ZBP1)**, um sensor citosólico de ácidos nucleicos induzível por interferon, que detecta ácidos nucleicos na **forma Z** gerados durante infecção viral ou estresse celular. Após a ativação, a ZBP1 aciona sinalização dependente de **RHIM** com **RIPK1/RIPK3** para coordenar programas transcricionais inflamatórios e vias de morte celular, incluindo **necroptose** e **apoptose**, com efeitos a jusante sobre a expressão de genes da imunidade inata. Esse eixo se cruza com a sinalização de **interferon tipo I**, a ativação de **NF-κB** e respostas associadas ao **inflamassoma** que moldam a defesa antiviral e a inflamação tecidual. A atividade desregulada de ZBP1 tem sido implicada em fenótipos inflamatórios e autoinflamatórios, suscetibilidade a infecções e patologia mediada pelo sistema imune, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos de detecção imune inata e morte celular regulada.

ZBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Zbp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Zbp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Zbp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZBP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Zbp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZBP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZBP1 em células tumorais com expressão de Zbp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.