YME1L1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409793

Visão geral

YME1L1 codifica uma metaloprotease mitocondrial i-AAA dependente de ATP, localizada na mitocôndria e embebida na membrana interna, onde promove o controle de qualidade de proteínas de membrana e ajuda a manter a integridade da cadeia respiratória. Ao acoplar a hidrólise de ATP à proteólise, YME1L1 regula a proteostase mitocondrial, a morfologia da organela e a adaptação ao estresse, incluindo a renovação de componentes mal dobrados ou danificados no domínio voltado para o espaço intermembranar. Ela contribui para a dinâmica mitocondrial por meio do processamento de fatores que influenciam a arquitetura das cristas e o equilíbrio entre fissão e fusão, vinculando sua atividade à homeostase bioenergética e ao manejo de espécies reativas de oxigênio. Alterações na função de YME1L1 têm sido associadas, em estudos genéticos, a fenótipos de disfunção mitocondrial e a mecanismos de doenças do neurodesenvolvimento ou neuromusculares, tornando-a relevante para modelar defeitos no controle de qualidade mitocondrial.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO YME1L1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene YME1L1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do YME1L1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do YME1L1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína YME1L1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de YME1L1 para a investigação da sinalização de YME1L1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) YME1L1 críticos para a função YME1L1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos YME1L1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo YME1L1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo YME1L1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus YME1L1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo YME1L1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR YME1L1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia YME1L1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo YME1L1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.