Y+LAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404403

概要

SLC7A7は、ヘテロ二量体型アミノ酸トランスポーター系y+Lの軽鎖サブユニットであるY+LAT1をコードしており、SLC3A2（4F2hc/CD98）と複合体を形成して、リシンやアルギニンなどの塩基性アミノ酸と中性アミノ酸の交換輸送を細胞膜越しに媒介します。このトランスポーター活性は細胞の窒素バランスを支え、アミノ酸の利用可能性を代謝恒常性や栄養感知プロセスと結び付けます。Y+LAT1の機能は、アミノ酸フラックスが増殖やシグナル出力に影響する上皮系および免疫系の文脈でとりわけ重要です。SLC7A7の病的な機能障害はリシヌリア性タンパク不耐症と関連しており、Y+LAT1依存的な輸送不全が全身性のアミノ酸不均衡や、それに続く炎症性合併症につながることを示しています。

Y+LAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC7A7遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC7A7内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC7A7のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Y+LAT1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Y+LAT1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC7A7欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Y+LAT1の機能に不可欠なSLC7A7エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC7A7ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Y+LAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびY+LAT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC7A7遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Y+LAT1 HDRプラスミド（h）および Y+LAT1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC7A7ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC7A7標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。