YAP Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-423742-LAC

O gene Yap1 de camundongo codifica o coativador transcricional YAP, um efetor central da via de sinalização Hippo que integra estímulos mecânicos, polaridade celular e a atividade de quinases a montante para regular a proliferação, a sobrevivência e o controle do tamanho dos órgãos. Quando a sinalização Hippo é atenuada, o YAP se acumula no núcleo e se associa a fatores de transcrição da família TEAD para ativar programas gênicos ligados à transição epitélio–mesênquima, à manutenção de células-tronco/progenitoras e à remodelação da matriz extracelular. A atividade do YAP se conecta às vias Wnt/β-catenina, TGF-β/SMAD, GPCR e PI3K–AKT, moldando respostas transcricionais dependentes do contexto em múltiplos tecidos. A sinalização desregulada de YAP é amplamente utilizada como eixo mecanístico em modelos de fibrose, regeneração tecidual e transformação oncogênica, tornando o Yap1 um alvo de alto valor para dissecar vias em pesquisa biomédica com camundongos.

As Partículas de Ativação Lentivirais YAP (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Yap1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais YAP (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Yap1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de YAP. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Yap1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.