Particules Lentivirales d'Activation (m) YAP: sc-423742-LAC

Le gène murin *Yap1* code le coactivateur transcriptionnel YAP, un effecteur central de la voie de signalisation Hippo, qui intègre les signaux mécaniques, la polarité cellulaire et l’activité des kinases en amont afin de réguler la prolifération, la survie et le contrôle de la taille des organes. Lorsque la signalisation Hippo est atténuée, YAP s’accumule dans le noyau et s’associe aux facteurs de transcription de la famille TEAD pour déclencher des programmes géniques liés à la transition épithélio-mésenchymateuse, au maintien des cellules souches/progénitrices et au remodelage de la matrice extracellulaire. L’activité de YAP interfère avec les voies Wnt/β-caténine, TGF-β/SMAD, GPCR et PI3K–AKT, façonnant des sorties transcriptionnelles dépendantes du contexte dans de multiples tissus. Une signalisation YAP dérégulée est largement exploitée comme axe mécanistique dans des modèles de fibrose, de régénération tissulaire et de transformation oncogénique, faisant de *Yap1* un nœud de haute valeur pour la dissection des voies de signalisation dans la recherche biomédicale murine.

Les particules d'activation lentivirales YAP (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Yap1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales YAP (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Yap1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de YAP. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Yap1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.