Plásmido CRISPR de Activación (h) YAP: sc-400040-ACT

El gen humano **YAP1** codifica la proteína asociada a Yes (**YAP**), un coactivador transcripcional que actúa como efector central de la vía Hippo para coordinar el control del tamaño de los órganos, la mecanotransducción y la homeostasis epitelial. Cuando la señalización de Hippo está inactiva, YAP se acumula en el núcleo y se asocia con factores de transcripción de la familia TEAD para regular programas génicos que controlan la progresión del ciclo celular, la supervivencia y la remodelación de la matriz extracelular. La actividad de YAP integra señales derivadas de la densidad celular, los complejos de polaridad, la señalización mediada por GPCR y la tensión del citoesqueleto de actina, conectando las fuerzas del microambiente con salidas transcripcionales. La desregulación de la señalización de YAP se asocia con un control anómalo del crecimiento y estados de diferenciación alterados en múltiples contextos de investigación relacionados con cáncer y fibrosis.

YAP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de YAP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

YAP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus YAP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional YAP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de YAP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo YAP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de YAP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía YAP en células tumorales con expresión de YAP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.