XRCC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401784-ACT

XRCC1 (proteína 1 de complementação cruzada do reparo por raios X) é uma proteína de arcabouço que coordena o reparo por excisão de bases e o reparo de quebras de fita simples, reunindo fatores de reparo nos locais de dano ao DNA. Ela interage com PARP1, DNA polimerase β e DNA ligase III para facilitar o processamento das extremidades e a ligação, mantendo assim a estabilidade do genoma durante o estresse replicativo e o dano oxidativo. A função de XRCC1 integra-se à sinalização da resposta a dano no DNA e a processos de remodelamento da cromatina que influenciam o acúmulo de mutações e a sobrevivência celular após insultos genotóxicos. Alterações na atividade de XRCC1 ou variações genéticas têm sido associadas a diferenças na capacidade de reparo do DNA e a fenótipos de suscetibilidade em cânceres e distúrbios neurológicos, tornando-a um nó útil para estudar mecanismos de manutenção do genoma.

XRCC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de XRCC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

XRCC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus XRCC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição XRCC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de XRCC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus XRCC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de XRCC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via XRCC1 em células tumorais com expressão de XRCC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.