XBP1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-423727-NIC

Xbp1は、IRE1αによるmRNAスプライシングの下流で小胞体ストレス応答（unfolded protein response：UPR）の中心的エフェクターとして機能する、塩基性ロイシンジッパー型転写因子XBP1をコードします。活性化されたXBP1は、分泌ストレス下でプロテオスタシスを回復するために、小胞体のタンパク質折りたたみ能を拡張する転写プログラムを駆動し、ER関連分解（ERAD）を制御し、脂質生合成を再構築します。マウス系では、XBP1は、慢性的なERストレスを受ける組織における分泌専門細胞の分化と機能、代謝適応、ならびに炎症シグナル間のクロストークを研究するために広く用いられています。XBP1活性の破綻は、持続的なUPRシグナル伝達やサイトカイン経路・生存経路の変化を介して、代謝疾患、神経変性、免疫介在性病態のモデルに関与すると示唆されています。

XBP1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Xbp1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Xbp1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Xbp1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Xbp1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。