Wnt-8b Double Nickase Plasmid (h): sc-405077-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Wnt-8b Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Wnt-8b Double-Nickase-Plasmid (h) und Wnt-8b Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf WNT8B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Wnt-8b Double Nickase Plasmid (h) | sc-405077-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Wnt-8b Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405077-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WNT8B kodiert das sekretierte Glykoprotein Wnt-8b, einen Liganden, der über die Korezeptoren Frizzled und LRP5/6 das kanonische Wnt/β‑Catenin-Signalwegprogramm aktiviert und so die Festlegung von Zellschicksalen, die Proliferation und die Gewebemusterbildung reguliert. Die Aktivität von Wnt-8b trägt zu Morphogengradienten und zu durch TCF/LEF vermittelten Transkriptionsprogrammen bei und beeinflusst neuroentwicklungsbezogene Prozesse einschließlich der Musterbildung von Vorder- und Mittelhirn. Eine fehlregulierte WNT8B-Expression oder ein Ungleichgewicht im Signalweg wurde mit veränderten Differenzierungszuständen und aberranter Wachstumssignalisierung in mehreren Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in der Wnt-getriebenen Biologie stützt. Als sekretierter Ligand des Signalwegs wird Wnt-8b häufig hinsichtlich seiner Effekte auf parakrine Signalgebung, stammzellähnliche Phänotypen sowie das Cross-Talk mit MAPK- und PI3K/AKT-Signalausgängen untersucht.
Wnt-8b Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des WNT8B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von WNT8B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die WNT8B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit WNT8B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.