Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
Wnt-3a CRISPR/Cas9 KO质粒 (m): sc-423716
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Wnt-3a CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在Wnt-3a基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Wnt-3a: sc-136163，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Wnt-3a CRISPR/Cas9 KO质粒 (m) | sc-423716 | 20 µg | $397.00 |
概述
小鼠 Wnt3a 编码分泌型糖蛋白 Wnt-3a，它是经典 Wnt/β-连环蛋白信号通路中的关键配体，参与调控胚胎模式建立、干细胞维持以及组织形态发生。Wnt-3a 与 Frizzled/LRP 受体结合后可稳定 β-连环蛋白，从而启动由 TCF/LEF 依赖的转录程序，协调细胞增殖、分化与命运决定。除发育过程中的作用外，Wnt3a 活性还与调控上皮–间质动态、器官发生以及再生反应的多条通路相交汇。Wnt-3a 信号失调常见于 β-连环蛋白异常激活等研究情境，包括肿瘤转化与发育缺陷，因此成为通路与机制研究中的核心节点之一。
Wnt-3a CRISPR/Cas9 KO质粒（m）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中Wnt3a基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对Wnt3a基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏Wnt3a开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使Wnt-3a蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建Wnt3a缺失的细胞模型，用于Wnt-3a信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 Wnt-3a 功能至关重要的 Wnt3a 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 Wnt3a 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 Wnt-3a CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 Wnt-3a CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 Wnt3a 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 Wnt-3a HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 Wnt-3a HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由Wnt3a同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定Wnt3a靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。